Detection of clostridium difficile toxins on patients with hematolojical malignency

Abstract

Clostridium difficile, asemptomatik taşıyıcılık, ılımlı diyare, psödomembransız kolit, psödomemranöz kolit (PMK), fulminantkolit/toksik megakolon gibi çok çeşitli klinik tablolara neden olabilen insan gastrointestinal sistem mikrobiyota üyesi, gram pozitif,sporlu anaerob çomakçıktır. Geniş spektrumlu antibiyotik kullanımı sonrası kolonda bulunan C.difficile suşları ekolojik avantajkazanıp çoğalmakta ve toksin sentezleyerek ishale neden olmaktadır. Son 20 yılda gerek hastane, gerekse toplum kaynaklıC.difficile enfeksiyonlarının insidans ve mortalitesinde belirgin bir artış olduğu göze çarpmaktadır. Bu çalışmada EskişehirOsmangazi Üniversitesi Hastanesi Hematoloji ve Onkoloji kliniklerinde terapötik veya proflaktik amaçlı geniş spektrumluantibiyotik kullanımı sonrasında ishal gelişen hastaların dışkısında toksijenik C.difficile varlığının iki farklı immündiagnostik testinyanısıra moleküler test kullanılarak araştırılması amaçlanmıştır. Ocak- Haziran 2015 tarihleri arasında Hematoloji ve Onkolojikliniklerinde yatan ve diyare gelişen 82 hastanın dışkı örnekleri incelenmiştir. Dışkı örnekleri kapaklı, sızdırmaz transport dışkıkaplarında bir saat içinde Mikrobiyoloji laboratuvarına ulaştırılmıştır. Glutamat dehidrogenaz enzimi (GDH) ve toksin A ve Bsaptamada EIA (enzim immunoassay) yöntemi (TECH LAB, Inc.), toksin B genini saptamada ise real-time PCR yöntemi (BDGeneOhm™ Cdiff Assay) kullanılmıştır. Elli altı örnekte her üç testle negatif sonuç elde edilmiş olup, dokuz hastada da yapılantestlerden en az iki tanesi pozitif olarak bulunmuştur. Üç hastada ise EIA (GDH, toksin A ve B) testleri pozitif iken moleküleryöntemle negatif sonuç alındı. Moleküler yöntem ile saptanan ve yalancı negatiflik olarak kabul ettiğimiz bu durumun tcdB genindegerçekleşen mutasyon veya sadece toksin B-/binary toksin sentezleyen suş nedeniyle olduğu düşünülmüştür. GDH EIA testininriskli hasta gruplarına uygulanacak güvenirlilikte bir tarama testi olduğu ve GDH pozitifliği durumunda ise toksin A ve B saptayanimmündiagnostik testler veya toksin B genini saptayan moleküler testlerden biriyle sonucun doğrulanmasının uygun bir yaklaşımolacağı sonucuna varıldı. Bu çalışmada Eskişehir Osmangazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Hastanesi Hematoloji ve Onkolojikliniklerinde terapötik veya proflaktik amaçlı geniş spekturumlu antibiyotik kullanımı sonrasında ishal gelişen hastaların dışkısındatoksijenik C.difficile varlığının iki farklı immündiagnostik testin yanısıra moleküler test kullanılarak araştırılması amaçlanmıştır.Ocak-Haziran 2015 tarihleri arasında Hematoloji ve Onkoloji kliniklerde yatan ve diyaresi olan 82 hastanın dışkı örnekleriincelenmiştir. Dışkı örnekleri kapaklı, sızdırmaz transport dışkı kaplarında bir saat içinde Mikrobiyoloji laboratuvarınaulaştırılmıştır. Glutamat dehidrogenaz enzimi (GDH) ve toksin A ve B saptamada EIA (enzim immunoassay) yöntemi (TECH LAB,Inc.), toksin B genini saptamada ise Real-Time PCR yöntemi (BD GeneOhm™ CdiffAssay) kullanılmıştır. Elli altı örnekte her üçtestle negatif sonuç elde edilmiş olup, dokuz hastada da yapılan testlerden en az iki tanesi pozitif olarak bulunmuştur. Üç hastada iseEIA (GDH, toksin A ve B) testleri pozitif iken moleküler yöntemle negatif sonuç alındı. Moleküler yöntem ile saptanan ve yalancınegatiflik olarak kabul ettiğimiz bu durumun tcdB geninde gerçekleşen mutasyon veya sadece toksin B-/binary toksin sentezleyensuş nedeniyle olduğu düşünülmüştur. GDH EIA testinin riskli hasta gruplarına uygulanacak güvenirlilikte bir tarama testi olduğu veGDH pozitifliği durumunda ise toksin A ve B saptayan immündiagnostik testler veya toksin B genini saptayan moleküler testlerdenbiriyle sonucun doğrulanmasının uygun bir yaklaşım olacağı sonucuna varıldı.